果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察

('果蝇唾液腺染色体标本的制备与观察一.实验目的通过实验掌握果蝇唾腺染色体的制片方法，了解果蝇唾腺染色体的形态结构特点并练习解剖果蝇幼虫的技术。二.实验原理唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫的幼虫唾液腺内的巨大染色体。果蝇的唾腺染色体是典型的巨大染色体，它的巨大性的成因是核内有丝分裂造成的。由于其染色体DNA经过多次复制（可达210～215次），但并未发生细胞核分裂，同时唾腺细胞中的染色体总是处在配对状态即体细胞联会，重复复制后的染色体聚集在一起，所以在显微镜下看到唾腺染色体要比一般的染色体大得多，又称多线染色体。三.实验用品1.实验材料：普通果蝇的三龄幼虫、生理盐水2.实验器材和试剂：双筒解剖镜、显微镜、解剖针、改良苯酚品红溶液、HCI四.实验方法和步骤1.幼虫的培养为了在解剖镜下便于操作，使用的幼虫应发育充分而且个体较大。在实验中人们通常采用两个措施控制幼虫的生长。A.良好的培养基提供了果蝇生长发育的必需营养，因此在培养瓶内放置的亲本不易过多，否则将产生过多的卵而造成养分不足。B.培养果蝇的环境温度应比正常培养时略低一些，一般可控制在16～20℃范围内，低温下生长的果蝇个体较大。果蝇属于完全变态的昆虫，成虫交尾后将卵产在培养基内。在适宜的温度下，卵发育为幼虫并经过一、二龄幼虫的发育后，三龄幼虫要爬到瓶壁上化蛹，为了能够在实验时获得较多的幼虫，可以分批将亲本放入培养瓶。实验时从培养瓶的瓶壁上挑选那些发育良好的、个体较大的幼虫。2.剖取唾腺用解剖针从培养瓶内挑取1只三龄幼虫置于载片上，并滴加1滴生理盐水。将载片放在载物台上，用解剖镜进行观察。首先将幼虫的头尾分清，果蝇的头部有一黑点（口器），头部不断作伸缩状。解剖时，双手各持一个解剖针，一支针先压在幼虫身体的前1/3处，另一支针压住果蝇头部并向前轻轻移动，即可将头部与身体拉开，仔细观察可看见一对透明做白的囊状体即为唾腺。在唾腺前端各伸出一条细管在前面汇合成一总管。果蝇的唾腺是单层细胞构成的，因此在解剖镜下可以看出其细胞界限。如果唾腺没有被拉出来，可用解剖针轻压虫体的断开处把唾腺挤压出来。操作时解剖针一定要轻轻拨动，切不可将肠管、神经管等全部截断从而影响视线。由于果蝇唾腺几乎透明，但是其上连带的脂肪体为乳白色，因此还是容易辨认出来的。3.去除脂肪体果蝇的唾腺上附有乳白色的脂肪体，如不去除，在制片时会在载片上形成大量脂肪滴，从而影响制片的质量。在去除脂肪体时，用解剖针的针尖轻轻操作尽量保持唾腺的完整性。如果在剥离脂肪时将唾腺碰断，仍然可以继续进行染色操作，因为在唾腺内有大量的细胞。4.酸解用解剖针将载片上的杂物全部去除，只留下唾腺。如果唾腺周围还有许多水分，应用吸水纸小心将水分洗净，注意要在解剖镜下操作，并要避免将剥离好的唾腺用纸吸走。用HCI酸解10min，再用蒸馏水洗2次。5.染色及压片加一滴改良苯酚品红染液染色10～15min。盖上盖玻片并覆盖一层吸水纸，用左手稳住载玻片，防止载玻片与盖玻片滑动，右手持解剖针，用针柄敲击盖片。用力要合适，将唾腺细胞压破，使染色体伸展开但又没造成染色体的断裂或重叠为最好。6.镜检观察五.实验结果见下图六.注意事项1.一定加生理盐水，否则唾腺易干。2.将脂肪组织清除干净。3.染色时间不可过长，否则背景也着色。4.压片时要揉。5.染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。8.吸水时勿将唾腺一起吸走',)