细胞电泳实验,细胞电泳实验报告

实验十二细胞电泳制作人：单成彬Reviewaboutbasictheoryandexperimentalmethodsofaniubilitymethod目录CONTENTS一、实验目的ResearchBackground01二、实验原理BasicConception02五、作业PracticalApplication05三、实验用品TheoreticalResearch03四、实验方法ExperimentalMethod04PARTONE实验目的4实验目的了解细胞电泳的原理及意义学习细胞(包括细胞器)电泳速度及其ζ电位的测定方法。PARTONEPARTTWOPARTTwoPARTTWO实验原理6二、实验原理所谓细胞电泳，就是将细胞制成悬浮溶液．使其单个游离的细胞分散于等渗的介质中。在外电场的作用下，细胞在特殊的装置内发生运动．这种现象称作细胞电泳。细胞表面具有一定的电荷(通常为负电荷)，它能象无机离子一样均匀地分布在介质中。细胞表面吸附了一层极薄的水膜，它与介质间存在着电位差，此电位差称为ζ电位。每种细胞在恒定的条件下(如温度、电压、电流，介质浓度，溶液的PH值等)其电泳速度和ζ电位十分稳定，但在各种有害因子病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以电泳速度和ζ电位值也发生改变(降低)。因此，利用细胞电泳对研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态，具有重要的意义，是一种十分有用的方法。PARTTHREE实验用品8实验用品鼠全血细胞，菠菜叶绿体。细胞电泳仪，光学显微镜，电子表，台微尺，目微尺，细胞电泳架，电泳毛细管，吸血量管，洗耳球，盐桥等。1．生理盐水甘油溶液：O.9％NaCl，0.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V(国际单位)的肝素。混匀备用。2．8％蔗糖甘油溶液：8％的蔗糖，O.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V(国际单位)的肝素，混匀后备用。材料用具试剂PARTFOUR试验方法10试验方法01(一)细胞电泳前的准备工作02(二)细胞(或细胞器)电泳速度及ζ电位的测定：某种试验方法的名称——这种方法的特点11(一)细胞电泳前的准备工作。1．目微尺校正：与实验二“台微尺与目微尺的校对”相同的操作。第一步第二步第三步第四步毛细管d／10层的测定细胞(或细胞器)悬液调制，用血球计数板对悬液计数，然后调制细胞(或细胞器)浓度，全血细胞约2000个／mm3，叶绿体为5000一10000个／mm3。显微镜固定及毛细管和银电极的清洁12显微镜固定及毛细管和银电极的清洁010203第一要点第二要点第三要点选可翻转的显微镜以免细胞在电泳时迅速下沉，脱离观察面。用肥皂水(最好用十二烷基磺酸钠)冲洗毛细管电泳室，然后用清水冲洗数次。用普通纱布将电泳架两端的银电极擦干净，以免正反两方向的电泳速度显著不一样。13(二)细胞(或细胞器)电泳速度及ζ电位的测定：01根据所使用的输入电源，将仪器背面的电源选择钮“交流一直流”，调至所要求的位置。02．接通电源，打开电源开关，指示灯亮。03．插入直流输出引线，并注意电极夹的正负极短路，以免损坏仪器。1404将调整开关至“工作”档，换向开关至“正”档，然后调节“电压调节’’及“电流调节”二旋钮，动物细胞电泳时，电压调至40伏，电流调至lmA；叶绿体电泳时，电压调至55伏，电流以调至lmA。调好后再将开关推到“停止”档。05将制备的样品灌注毛细管电泳室，其灌注方法是：(1)将毛细管斜插入被测样品中，由于毛吸管吸引作用，则整个管腔内充满了被测样液。(2)也可用橡皮胶头的吸吮作用将样品灌满电泳室。将注灌样品的毛细管水平移至电泳架上，并夹紧，然后利用盐桥将细管与银极接通。06将电泳架移至显微镜载物台上，调整焦距，使焦面落在管腔的d／lO—d／15处。为了对照可测d／2处的电泳速度。07通过直流输出引线夹，分别与两极接通。08测量(1)将开关调至“工作”档，再调节电压使其达到原来(即操作4中所调)的水平，由于电场作用，在视野内可观察到管腔内细胞的移动。记录某个细胞通过目微尺2格的时间。(2)将开关调至“停止”档，细胞即停止移动。(3)将换向开关调至“负”处，调整高速开关调至“工作”档，由于电流方向变更，则细胞向相反方向移动，此时再选择一细胞按上述方法，记录下电泳时间。(4)如此反复测量多次，分别记录实验数据。(5)实验结束后，将电压及电流二钮调回到“0”处，调整开关至“停止”处，并断开电源；将毛细管洗干净，同时将电极擦净，放回原处，显微镜恢复到直立状态。9．电泳速度计算：根据所测目微尺的实际刻度值，计算出每次的电泳距离S，所测电泳距离的总和除以所测时间的总和，得出电泳的平均速度，以下式表示：w×r10．ζ电位的计算：根据所测电泳速度，可用下式求得ζ电位：THANKS